Авторами статьи для ранней диагностики стельности у коров наряду с ректальной диагностикой был использован способ ИФА исследования путем определения содержания PAG в образцах сыворотки крови коров. Средняя концентрация PAG в сыворотке крови у коров с сроком беременности 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5,4,0 месяца составила, 1,590, 1,894, 1,416, 2,213, 1,784, 1,601 оптических единиц, соответственно. Хотя, теоретически ожидалось повышение концентрации PAG в сыворотке крови коров с увеличением срок стельности. В двух случаях зарегистриовано несовпадение результатов ректального обследования с результатами ИФА исследования, чтио составляет 3,5%.
ИФА диагностика стельности, PAG, имплантация эмбриона, истинный признак беременности, ректальная диагностика, искусственное осеменение
Введение. Своевременная диагностика стельности на молочных фермах имеет важное практическое значение, так как неплодотворно осемененные коровы наносят большой экономический ущерб из-за потери молока и недополучения приплода. В ветеринарной гинекологии существуют множественные способы диагностики стельности у коров, такие как, ректальная пальпация, УЗИ сканирование репродуктивных органов, рефлексологический способ, лабораторные методы диагностики основанные на обнаружений в сыворотке крови гормона прогестерона или специфического белка беременности (PAG). Каждый способ диагностики имеет свои преимущества и недостатки [1].
Более распространенным способом диагностики стельности у коров на ранней стадии беременности является определение содержание гормона прогестерона в образцах молока, сыворотки крови отобранных на 19-21-й день после искусственного осеменения методом иммуноферментного анализа (ИФА). Основными факторами, сдерживающими широкое применение ИФА-способа диагностики стельности у коров являются дефицит оснащенных необходимыми обрудованиями лабораторий, отсутствие необходимых реагентов для лабораторной диагностики. По результатам ИФА исследования, если концентрация прогестерона в образцах сыворотки крови составляет менее 4 нг/мл, тогда корова считается небеременной, 4-7 нг/мл – сомнительной стельности, если уровень прогестерона более 7 нг/мл, корова стельная. Однако, иногда можно получить ложноположительные результаты в результате патологии половых органов у коров (персистентное желтое тело). Обнаружение в образцах сыворотки крови PAG в количестве более 0,300 оптических единиц свидетельствует, что исследуемая корова стельная и данный признак является истинным признаком беременности. С помощью метода ИФА можно определить стельность у коров на ранней стадии путем определения содержания PAG в образцах сыворотки крови на 25-й день после искусственного осеменения. В качестве альтернативного способа диагностики стельности у коров зарубежные ученые используют метод определения Interferon tau (IFNT) в сыворотке крови на 12-14-й дни после искусственного осеменения, увеличение концентрации IFNT указывает на беременность [2]. Таким образом, в нашей работе в качестве альтернативного способа диагностики одновременно с ректальным методом был использован метод обнаружения PAG с помощью ИФА.
Целью работы было изучение эффективности использования определения содержания PAG в образцах сыворотке крови методом ИФА исследования для ранней диагностики стельности у коров.
Материалы и методы исследования. В качестве материала для иммуноферментного анализа использовали 57 образцов сыворотки крови коров частного сектора сельского округа «Жетитобе» Жуалынского района Жамбылской области. В период с 11 мая по 13 июня 2023 года нами было проведено искусственное осеменение коров частного сектора в количестве 161 головы, в сентябре 2023 года проводилось ректальное исследование коров на стельность и был осуществлен выборочно сбор образцов сыворотки крови (n=57) для ИФА диагностики стельности. Определение концентрации плацентраного белка (pregnancy-associated glycoproteins, PAG) в образцах сыворотки крови проводилось в лаборатории кафедры «Акушерства, хирургии и биотехнологии воспроизводства» Казахского национального аграрного исследовательского университета, был использован иммунноферментный анализатор ELx808 (микропланшетный ридер) и коммерческий набор «Bovine Pregnancy Test Kit» Американской компании IDEXX.
Результаты исследования. В период с 12 по 16 сентября 2023 года нами проводилось ректальное исследование коров и были определены количество стельных и бесплодных коров. Искусственное осеменение коров нами проводилось ректоцервикальным способом в период с 11 мая по 13 июня спермой племенного быка симментальской породы, затем для «зачистки» был использован способ вольного спаривания. Было важно, определение точного срока стельности, так как небольшие сроки стельности свидетельствовали о наступлений беременности в результате естественного осеменения беспородным быком производителем. Таким образом, по результатам ректальной диагностики из 57 коров 4 оказались бесплодными, у двух коров 1,5 месяца, у трех коров сроки стельности 2,0 месяца, у одной коровы 2,5 месяца (табл. 1). У этих животных сроки стельности не соответствуют с датой искусственного осеменения и возможно, указанные коровы стали стельными в результате «зачистки» путем естественного осеменения.
Таблица 1 – Результаты ректальной диагностики и ИФА исследования образцов сыворотки крови коров (протокол испытания от 19-20 сентября 2023 г)
|
№ |
Дата искусственного осеменения |
Инд № коровы |
Результаты ректальной диагностики (12-16 сентября 2023 г) |
Содержание PAG (19-20.09.2023 г) |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
1 |
20.05.23 |
45202516 |
3,5 мес |
2,623 |
|
2 |
27.05.23 |
44562405 |
3,5 мес |
3,404 |
|
3 |
23.05.23 |
00064669 |
Бесплодная |
0,106 |
|
4 |
22.05.23 |
00064666 |
3,5 мес |
1,846 |
|
5 |
13.05.23 |
46008835 |
4 мес |
1.525 |
|
6 |
12.05.23 |
б/н |
4 мес |
3.122 |
|
7 |
26.05.23 |
45120715 |
4 мес |
1.464 |
|
8 |
18.05.23 |
45738929 |
4 мес |
1.532 |
|
9 |
28.05.23 |
45955289 |
4 мес |
1.434 |
|
10 |
26.05.23 |
б/н |
4 мес |
1.211 |
|
11 |
08.06.23 |
44983929 |
Бесплодная |
0.101 |
|
12 |
12.06.23 |
б/н комолая |
3 мес |
3.547 |
|
13 |
17.05.23 |
б/н |
3,5 мес |
1,217 |
|
Окончание таблицы 1 |
||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
14 |
31.05.23 |
46105681 |
3,5 мес |
2,811 |
|
15 |
24.05.23 |
б/н |
3,5 мес |
2,296 |
|
16 |
24.05.233 |
б/н |
2 мес |
2,224 |
|
17 |
14.05.23 |
б/н |
4 мес |
1,618 |
|
18 |
15.05.23 |
45872396 |
4 мес |
1,957 |
|
19 |
12.05.23 |
4552118 |
4 мес |
1,026 |
|
20 |
15.05.23 |
б/н |
4 мес |
2,110 |
|
21 |
16.05.23 |
45738774 |
4 мес |
1,612 |
|
22 |
14.05.23 |
45782379 |
4 мес |
1,594 |
|
23 |
26.05.23 |
б/н |
4 мес |
1,413 |
|
24 |
17.05.23 |
б/н |
4 мес |
1,172 |
|
25 |
25.05.23 |
45738765 |
4 мес |
1,210 |
|
26 |
25.05.23 |
б/н |
4 мес |
1,169 |
|
27 |
25.05.23 |
45738770 |
4 мес |
1,013 |
|
28 |
25.05.23 |
б/н |
4 мес |
1,645 |
|
29 |
28.05.23 |
4520206 |
4 мес |
1,767 |
|
30 |
25.05.23 |
44887884 |
4 мес |
1,648 |
|
31 |
14.05.23 |
44887885 |
4 мес |
2,840 |
|
32 |
06.06.23 |
б/н |
2,5 мес |
1,416 |
|
33 |
26.05.23 |
45383951 |
4 мес |
2,147 |
|
34 |
07.06.23 |
69391404 |
1.5 мес |
1,709 |
|
35 |
28.05.23 |
69384859 |
3,5 мес |
1,706 |
|
36 |
02.06.23 |
70244167 |
3.5 мес |
1,425 |
|
37 |
02.06.23 |
70244165 |
3.5 мес |
1,603 |
|
38 |
02.06.23 |
70293293 |
3,5 мес |
3,031 |
|
39 |
01.06.23 |
70244162 |
3,5 мес |
2,224 |
|
40 |
01.06.23 |
70243636 |
3.5 мес |
2,029 |
|
41 |
01.06.23 |
70244164 |
2 мес |
1,491 |
|
42 |
01.06.23 |
70244166 |
Бесплодная |
1,064 |
|
43 |
04.06.23 |
453422968 |
3,5 мес |
1,319 |
|
44 |
07.06.23 |
45342970 |
3.5 мес |
1,491 |
|
45 |
01.06.23 |
45342953 |
3.5 мес |
1,526 |
|
46 |
07.06.23 |
45342951 |
2 мес |
1,968 |
|
47 |
02.06.23 |
45342958 |
3.5 мес |
1,785 |
|
48 |
01.06.23 |
б/н |
3.5 мес |
1,688 |
|
49 |
10.06.23 |
72623920 |
3 мес |
1,069 |
|
50 |
10.06.23 |
73188676 |
3 мес |
1,844 |
|
51 |
12.06.23 |
45111910 |
3 мес |
1,952 |
|
52 |
12.06.23 |
б/н |
3 мес |
2,946 |
|
53 |
12.06.23 |
б/н |
3 мес |
3,562 |
|
54 |
04.06.23 |
45342956 |
Бесплодная |
1,915 |
|
55 |
07.06.223 |
б/н |
3 мес |
1,565 |
|
56 |
05.06.23 |
450373369 |
1,5 мес |
1,471 |
|
57 |
05.06.23 |
46009404 |
3 мес |
1,225 |
Примечание: б/н – без номера, значение PAG более 0,300 ОП стельная, ОП – оптическая плотность.
Однако, как видно из таблицы 1 у двух коров (инв №70244166, 45342956) которые по результатам ректального исследования были бесплодными, обнаружена достаточно высокая концентрация PAG, 1,064 и 1,915, соответственно. У коров с сроком беременности 1,5 месяца (n=2) средняя концентрация PAG составила 1,590, с сроком беременности 2 месяца (n=3) средняя концентрация PAG составила 1,894, с сроком беременности 2,5 месяца (n=1) средняя концентрация PAG составила 1,416, с сроком беременности 3 месяца (n=8) средняя концентрация PAG составила 2,213, сроком беременности 3,5 месяца (n=17) средняя концентрация PAG составила 1,784, сроком беременности 4,0 месяца (n=22) средняя концентрация PAG составила 1,601.
Анализ результатов ИФА исследования показывает (таблица 1), что у коров концентрация PAG в образцах сыворотки крови меняется скачкообразно, хотя теоретически ожидалось повышение содержания PAG с увеличением срока стельности у коров. Также, у двух бесплодных, по резултатам ректального исследования, наблюдается повышенное содержание PAG, данный факт является следствием артефакта или ошибочного результата ректальной диагностики.
Выводы. По результатам ректальной пальпации репродуктивных органов коров и ИФА исследования уровень неточности ректальной диагностики с результатами иммуноферментного анализа составила 3,50%, т.е. у двух коров которые оказались бесплдоными по результатам ректального исследования выявлены стельность. Можно предполагать, что стельность у шести коров с сроком стельности от 1,5 до 2,5 месяца наступила в результате естественного осеменения беспородным быком производителем. Выявлена тенденция скачкообразного изменения динамики содержания PAG в образцах сыворотки у исследуемых коров.
Финансирование. Данная работа выполнена в рамках реализации 019 инновационной программы «Управления сельского хозяйства акимата Жамбылской области», согласно договора «Договор о государственных закупках работ, не связанных со строительством» №30 от 11 апреля 2023 года.
1. Определение PAG в сыворотке крови коров методом иммуноферментного анализа и его диагностическое значение / А. Б. Багдат, Е. С. Усенбеков, Н. К. Акильжанов, Г. С. Шманов, М. Е. Алимбекова, Л. С. Аубекерова // Научное обеспечение животноводства Сибири: материалы III Международной научно-практической конференции, 16-17 мая 2019 г. – Красноярск, 2019. – С. 70–73.
2. In vivo expression of interferon tau mRNA by the embryonic trophoblast and uterine concentrations of interferon tau protein during early pregnancy in the cow / R. Robinson, M. Fray, D. Wathes, G. Lamming, G. Mann // Mol Reprod Dev. – 2006. – Vol. 73. – pp. 470–474.
