Russian Federation
578.76
578.828
The article presents data on experimental infection of guinea pigs with bovine leukemia virus (BLVV). Animals were intraperitoneally injected with a cell suspension of lymphocytes obtained from a cow with leukemia in hematological form. It was found that in 100% of individuals, specific fluorescence of lymphocytes was detected on the 14th day after infection, and proviral DNA was detected on the 21st day. The presence of the virus was also confirmed using PCR and RNIF in all animals on the 180th day after infection.
guinea pig, VLKRS, lymphocytes, immunofluorescence
Естественным хозяином вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) является крупный рогатый скот. Межвидовая передача вируса лейкоза крупного рогатого скота в условиях эксперимента изучена на крысах [1], курах [2], козах [3], овцах [4] и кроликах [5]. Из всех перечисленных животных наиболее приемлемой моделью для оценки новых стратегий профилактики и лечения является экспериментальное заражение кроликов путем инокуляции клеток, инфицированных ВЛКРС [6]. Необходимо отметить, что использование кроликов с целью разработки методов коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного экспериментальной ретровирусной инфекцией, имеет существенные недостатки, обусловленные невозможностью одновременного использования большого их количества в эксперименте, особенно когда требуется изучение разных схем и доз введения иммунобиологических препаратов. К тому же, их содержание и кормление требует достаточно высоких материальных затрат. Морские свинки часто используются в качестве экспериментальной модели и биопробы, так как их организм обладает высокой чувствительностью к возбудителям многих инфекционных заболеваний человека и сельскохозяйственных животных [7].
Цель исследования – изучение возможности моделирования инфекции ВЛКРС на морских свинках
Материал и методы исследований. Объектом исследования служили морские свинки линии агути 4-5-месячного возраста, массой 400-450 г. Животным опытной группы (n=10) вводили внутрибрюшинно клеточную взвесь лимфоцитов, выделенную из свежеполученной стабилизированной крови больной лейкозом коровы на градиенте плотности 17%-ного раствора тразографа, 1,0 мл, однократно. Животным контрольной группы (n=5) вводили физиологический раствор тем же способом.
Отбор проб крови осуществляли микропипеткой из ретроорбитального венозного сплетения на 14-, 21-, 30-, 60-, 90-, 120- и 180-е сутки после введения вируссодержащей взвеси. Диагностические исследования осуществляли с помощью реакции непрямой флюоресценции (РНИФ) в соответствии с методическими рекомендациями Н.Н. Новиковой с соавт. [8], а также полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соответствии с инструкцией по применению комплектов реагентов производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Амплификацию проводили на анализаторе-термоциклере для детекции нуклеиновых кислот методом ПЦР в реальном времени ICycler iQ5 (BioRad, США).
Результаты исследований и их обсуждение. Анализ диагностических исследований, проведенных на морских свинках в разные сроки после инокуляции вируссодержащей суспензии, показал, что при постановке ПЦР провирус лейкоза крупного рогатого скота идентифицирован у 60% морских свинок на 14-е сутки и у 100% – на 21-е сутки от начала эксперимента. В то же время с помощью иммунофлюоресцентного метода регистрировали специфическое свечение в мазках крови у 100% особей как на 14-е, так и на 21-е сутки после инфицирования (табл. 1).
Таблица 1 – Диагностические исследования на лейкоз морских свинок в разные сроки после инфицирования ВЛКРС
|
Группа |
Метод исследования |
Срок исследования после инфицирования, сутки |
||||||
|
14 |
21 |
30 |
60 |
90 |
120 |
180 |
||
|
Опытная |
ПЦР |
6/10 |
10/10 |
1/5 |
5/5 |
4/5 |
4/5 |
5/5 |
|
РНИФ |
10/10 |
10/10 |
5/5 |
5/5 |
4/5 |
4/5 |
5/5 |
|
|
Контрольная |
ПЦР |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
|
РНИФ |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
|
Примечание: числитель – количество положительно прореагировавших животных; знаменатель – количество животных в группе.
Через 30 суток после внутрибрюшинного введения взвеси лимфоцитов отмечалось отсутствие у 4-х их 5-и особей провирусной ДНК, однако во всех случаях с помощью РНИФ выявляли лейкозный антиген.
Начиная с 60-х суток, флюоресценцию лимфоцитов и провирусную ДНК регистрировали у всех инфицированных морских свинок, за исключением 90-х и 120-х суток, когда у одной особи реакция была отрицательной, но, тем не менее наличие вируса подтвердилось в дальнейшем на 180-е сутки.
Следует отметить, что животные контрольной группы на протяжении всего эксперимента как при постановке ПЦР, так и РНИФ имели негативную реакцию.
Заключение
На основании полученных результатов можно заключить, что инокуляция морским свинкам клеточной взвеси лимфоцитов, полученных от больной лейкозом коровы, вызывает инфицирование 100% животных уже на 14-е сутки и подтверждается в дальнейшем в течение 180 суток (период наблюдений).
1. The hematobiochemical status of Wistar rat line under the bovine leukemia virus experimental infection / E. S. Krasnikova, F. Bouchemla, A. V. Krasnikov [et al.] // Vet. World. – 2019. – Vol. 12 (3). – P. 382–388.
2. Induction of leukemia in chicken by bovine leukemia virus due to insertional mutagenesis / V. Altanerova, J. Ban, R. Kettmann, C. Altaner // Arch Geschwulstforsch. – 1990. – Vol. 60 (2). – P. 89–96.
3. Goat lymphosarcoma from bovine leukemia virus / C. Olson, R. Kettmann, A. Burny, R. Kaja // J. Natl. Cancer Inst. – 1981. – Vol. 67 (3). – P. 671–675.
4. Development of leukemia and lymphosarcoma induced by bovine leukemia virus in sheep: a hematopathological study / S. Djilali, A. L. Parodi, D. Levy, G. L. Cockerell // Leukemia. – 1987. – Vol. 1. – P. 777–781.
5. Mezhvidovaya peredacha virusa leykoza krupnogo rogatogo skota v eksperimente / M. I. Gulyukin, N. G. Kozyreva, L. A. Ivanova [i dr.] // Voprosy virusologii. – 2015. – T. 60. – №5. – S. 32–37.
6. Persistent infection of rabbits with bovine leukemia virus associated with development of immune dysfunction / C. R. Wyatt, D. Wingett, J. S. White [et al.] // J. Virol. – 1989. – Vol. 63(11). – P. 4498–4506.
7. Funkcional'noe sostoyanie neytrofilov u inficirovannyh mikobakteriyami morskih svinok pod deystviem immunomodulyatora KIM-M2 / V. S. Vlasenko, E. A. Kosobokov, N. A. Dengis [i dr.] // Permskiy agrarnyy vestnik. – 2022. – № 3 (39). – S. 63–69.
8. Primenenie reakcii nepryamoy immunoflyuorescencii dlya diagnostiki leykoza krupnogo rogatogo skota: metodicheskie rekomendacii / N. N. Novikova, S. T. Bayseitov, V. S. Vlasenko, A. P. Krasikov; FGBNU Omskiy ANC, FGBOU VO Omskiy GAU im. P.A. Stolypina. – Almaty, 2020. – 17 s.
