Россия
УДК 578.76 Патогенез вирусных забалеваний
УДК 578.828 Retroviridae. Ретровирусы. РНК-содержащие опухолевые вирусы
В статье представлены данные о проведении экспериментального инфицирования вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) морской свинки. Животным внутрибрюшинно вводили клеточную взвесь лимфоцитов, полученную от больной лейкозом коровы в гематологической форме. Установлено, что у 100% особей на 14-е сутки после заражения выявлена специфическая флюоресценция лимфоцитов, а провирусная ДНК – на 21-е сутки. Наличие вируса также было подтверждено с помощью ПЦР и РНИФ у всех животных на 180-е сутки после заражения.
морская свинка, ВЛКРС, лимфоциты, иммунофлюоресценция
Естественным хозяином вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) является крупный рогатый скот. Межвидовая передача вируса лейкоза крупного рогатого скота в условиях эксперимента изучена на крысах [1], курах [2], козах [3], овцах [4] и кроликах [5]. Из всех перечисленных животных наиболее приемлемой моделью для оценки новых стратегий профилактики и лечения является экспериментальное заражение кроликов путем инокуляции клеток, инфицированных ВЛКРС [6]. Необходимо отметить, что использование кроликов с целью разработки методов коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного экспериментальной ретровирусной инфекцией, имеет существенные недостатки, обусловленные невозможностью одновременного использования большого их количества в эксперименте, особенно когда требуется изучение разных схем и доз введения иммунобиологических препаратов. К тому же, их содержание и кормление требует достаточно высоких материальных затрат. Морские свинки часто используются в качестве экспериментальной модели и биопробы, так как их организм обладает высокой чувствительностью к возбудителям многих инфекционных заболеваний человека и сельскохозяйственных животных [7].
Цель исследования – изучение возможности моделирования инфекции ВЛКРС на морских свинках
Материал и методы исследований. Объектом исследования служили морские свинки линии агути 4-5-месячного возраста, массой 400-450 г. Животным опытной группы (n=10) вводили внутрибрюшинно клеточную взвесь лимфоцитов, выделенную из свежеполученной стабилизированной крови больной лейкозом коровы на градиенте плотности 17%-ного раствора тразографа, 1,0 мл, однократно. Животным контрольной группы (n=5) вводили физиологический раствор тем же способом.
Отбор проб крови осуществляли микропипеткой из ретроорбитального венозного сплетения на 14-, 21-, 30-, 60-, 90-, 120- и 180-е сутки после введения вируссодержащей взвеси. Диагностические исследования осуществляли с помощью реакции непрямой флюоресценции (РНИФ) в соответствии с методическими рекомендациями Н.Н. Новиковой с соавт. [8], а также полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соответствии с инструкцией по применению комплектов реагентов производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Амплификацию проводили на анализаторе-термоциклере для детекции нуклеиновых кислот методом ПЦР в реальном времени ICycler iQ5 (BioRad, США).
Результаты исследований и их обсуждение. Анализ диагностических исследований, проведенных на морских свинках в разные сроки после инокуляции вируссодержащей суспензии, показал, что при постановке ПЦР провирус лейкоза крупного рогатого скота идентифицирован у 60% морских свинок на 14-е сутки и у 100% – на 21-е сутки от начала эксперимента. В то же время с помощью иммунофлюоресцентного метода регистрировали специфическое свечение в мазках крови у 100% особей как на 14-е, так и на 21-е сутки после инфицирования (табл. 1).
Таблица 1 – Диагностические исследования на лейкоз морских свинок в разные сроки после инфицирования ВЛКРС
|
Группа |
Метод исследования |
Срок исследования после инфицирования, сутки |
||||||
|
14 |
21 |
30 |
60 |
90 |
120 |
180 |
||
|
Опытная |
ПЦР |
6/10 |
10/10 |
1/5 |
5/5 |
4/5 |
4/5 |
5/5 |
|
РНИФ |
10/10 |
10/10 |
5/5 |
5/5 |
4/5 |
4/5 |
5/5 |
|
|
Контрольная |
ПЦР |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
|
РНИФ |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
|
Примечание: числитель – количество положительно прореагировавших животных; знаменатель – количество животных в группе.
Через 30 суток после внутрибрюшинного введения взвеси лимфоцитов отмечалось отсутствие у 4-х их 5-и особей провирусной ДНК, однако во всех случаях с помощью РНИФ выявляли лейкозный антиген.
Начиная с 60-х суток, флюоресценцию лимфоцитов и провирусную ДНК регистрировали у всех инфицированных морских свинок, за исключением 90-х и 120-х суток, когда у одной особи реакция была отрицательной, но, тем не менее наличие вируса подтвердилось в дальнейшем на 180-е сутки.
Следует отметить, что животные контрольной группы на протяжении всего эксперимента как при постановке ПЦР, так и РНИФ имели негативную реакцию.
Заключение
На основании полученных результатов можно заключить, что инокуляция морским свинкам клеточной взвеси лимфоцитов, полученных от больной лейкозом коровы, вызывает инфицирование 100% животных уже на 14-е сутки и подтверждается в дальнейшем в течение 180 суток (период наблюдений).
1. The hematobiochemical status of Wistar rat line under the bovine leukemia virus experimental infection / E. S. Krasnikova, F. Bouchemla, A. V. Krasnikov [et al.] // Vet. World. – 2019. – Vol. 12 (3). – P. 382–388.
2. Induction of leukemia in chicken by bovine leukemia virus due to insertional mutagenesis / V. Altanerova, J. Ban, R. Kettmann, C. Altaner // Arch Geschwulstforsch. – 1990. – Vol. 60 (2). – P. 89–96.
3. Goat lymphosarcoma from bovine leukemia virus / C. Olson, R. Kettmann, A. Burny, R. Kaja // J. Natl. Cancer Inst. – 1981. – Vol. 67 (3). – P. 671–675.
4. Development of leukemia and lymphosarcoma induced by bovine leukemia virus in sheep: a hematopathological study / S. Djilali, A. L. Parodi, D. Levy, G. L. Cockerell // Leukemia. – 1987. – Vol. 1. – P. 777–781.
5. Межвидовая передача вируса лейкоза крупного рогатого скота в эксперименте / М. И. Гулюкин, Н. Г. Козырева, Л. А. Иванова [и др.] // Вопросы вирусологии. – 2015. – Т. 60. – №5. – С. 32–37.
6. Persistent infection of rabbits with bovine leukemia virus associated with development of immune dysfunction / C. R. Wyatt, D. Wingett, J. S. White [et al.] // J. Virol. – 1989. – Vol. 63(11). – P. 4498–4506.
7. Функциональное состояние нейтрофилов у инфицированных микобактериями морских свинок под действием иммуномодулятора КИМ-М2 / В. С. Власенко, Е. А. Кособоков, Н. А. Денгис [и др.] // Пермский аграрный вестник. – 2022. – № 3 (39). – С. 63–69.
8. Применение реакции непрямой иммунофлюоресценции для диагностики лейкоза крупного рогатого скота: методические рекомендации / Н. Н. Новикова, С. Т. Байсеитов, В. С. Власенко, А. П. Красиков; ФГБНУ Омский АНЦ, ФГБОУ ВО Омский ГАУ им. П.А. Столыпина. – Алматы, 2020. – 17 с.
